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使用染色液前需清楚其的操作方法及注意事項
發布時間:2018-08-29   點擊次數:965次
     染色液溶于水,微溶于乙醇。水溶液顯酸性。在實驗室,草酸銨可以和溶液中的鈣、鎂等離子生成沉淀,用過濾的方法除去溶液中的鈣、鎂離子。染色液用于免疫組化染色,應用在Dako 自動染色系統上。
  染色液的使用方法:
  1.顯色液配制
  10mM Tris-HCl (pH7.6)   9mL  +DAB (diaminobezidin 3,3-二氨基聯苯胺) +0.3%(W/V)  NiCl2 或CoCl2   1mL ,顯色時加入5-10mL 30%H2O2 混勻后立即使用
  2. 顯色
  準備好含有待測蛋白的固相膜:包括電泳、轉印、封阻、一抗(或生物素)處理、辣根過氧化酶(HRP)標記的二抗(或鏈霉親和素)處理、清洗等步驟。
  3.加入適量的DAB顯色液,鋪滿整個固相膜表面(可按比例增減)。
  4. 置于平式搖蕩儀上,在室溫下孵育2至5分 鐘,避免光照(暗室操作),直至棕褐色沉淀出現。
  5.用鑷子夾起固相膜,放進無離子水里清洗。
  6.空氣中晾干。
  7. 拍照記錄 。
  染色液的注意:
  1. 溶液應低溫密封保存。如有結晶析出,應確保結晶完全溶解再行使用;
  2. 顯色工作液應現用現配,新鮮配制的工作液應為無色或淺棕色,如顏色過深,請勿使用;
  3. DAB在常溫下不穩定,每次取用后均應及時加蓋密封放回冰箱,以免因DAB分解影響實驗,或因滲漏造成實驗環境污染;
  4. DAB有潛在致突變作用,操作時應注意穿戴好防護用具。

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